Оценка доли живых и мёртвых организмов в зоо- и фитопланктоне с помощью флуоресцентного маркера
Это новая работа для проточного цитометра и люминесцентного блока
микроскопа Nikon Eclipse TS100F. В качестве маркера используется
диацетат флуоресцеина
(FDA), специфичный к активности фермента эстеразы. Живые
клетки/организмы окрашиваются FDA
и флуоресцируют зелёным цветом. Дарья
Литвинюк (отдел функционирования морских экосистем) и Лариса Аганесова (отдел марикультуры и прикладной океанологии) используют этот метод для
определения доли живых организмов в культурах и нативных пробах
зоопланктона (см. рис. 1 и 2). Кроме того, FDA планируется использовать
в проточной цитометрии фитопланктона
(работа совместно с н.с. отдела планктона Людмилой Манжос) (рис. 3)
и культур микроводорослей (Екатерина Соломонова - отдел экологической
физиологии водорослей)(рис. 3 и 4).
Рис. 1. Движение окрашенной FDA копеподы. Автор снимка: Д. Литвинюк, культура копепод предоставлена Л. Аганесовой.
Рис. 2. Яркая флуоресценция живых копепод. Каждая пара снимков представляет одну и ту же особь в световом (слева) и люминесцентном (справа) режимах.
Рис. 3. Две клетки Prorocentrum micans, одна из которых флуоресцирует после окраски FDA. Проба фитопланктона со станции на 2 милях, июль 2009 г.
Рис. 4. Левый график - проточная цитометрия культуры Phaeodactylum tricornutum, окрашенной диацетатом флуоресцеина (FDA). Правый график - то же, но после кратковременного замораживания (-20ºС) и размораживания культуры (большинство клеток мертвы, но сохранили пигменты). FL4 - автофлуоресценция пигментов в красной области спектра, FL1 - флуоресценция в зелёной области спектра (соответствует максимуму эмиссии FDA). В секторе А2 - живые клетки (наличие пигментов - сильный сигнал FL4, и активных ферментов - сильный сигнал FL1), на графике слева хорошо видны два кластера клеток, содержащих разное количество пигментов. В секторе А4 на графике слева - мертвые клетки (наличие пигментов - сильный сигнал FL4, но отсутствие ферментативной активности - слабый сигнал FL1), которые присутствовали в культуре изначально, на графике справа - все мёртвые клетки, включая те, которые погибли при замораживании пробы. Результаты получены Е. Соломоновой и В. Мухановым на проточном цитометре Cytomics FC 500.
Оценка доли живых и мёртвых организмов в зоо- и фитопланктоне с помощью флуоресцентного маркера
